جداسازی، تخلیص و بررسی خاصیت باکتری کشی کال پروتکتین از نوتروفیل های خون گاو

زمینه مطالعه: نوتروفیل‌های گاو پپتیدهای یاخته‌کشی تولید می‌کنند که باعث از بین بردن میکروارگانیسم‌های قارچی و باکتریایی از جمله عامل ماستیت می‌شوند. هدف: استخراج و تخلیص پروتئین P7/P23 گاوی و بررسی فعالیت ضد باکتریایی آن علیه باکتری‌های Staphylococcus aureus، Aeromonas hydrophila و Yersinia ruckeri بود. روش کار: ابتدا یاخته‌های نوتروفیل گاو توسط روش رسوب‌دهی با دکستران و سانتریفیوژ روی فایکول از سایر یاخته‌های خون سالم جداسازی گردیدند. سپس زنده‌مانی آنها با کمک تریپان بلو تعیین و پس از خرد کردن آنها با سونیکاتور مقدار پروتیئن‌های تام سیتوزولی توسط سانتریفیوژ جداسازی شد. در مرحله بعد، پس از جداسازی به منظور تخلیص ابتدا دیالیز و سپس کروماتوگرافی تعویض یونی دو مرحله‌ای صورت گرفت. بررسی فعالیت ضد یاخته‌ای آن‌، با روش‌های تعیین حداقل غلظت مهار کنندگی، حداقل غلظت کشندگی و آزمون انتشار در آگار بررسی شد. نتایج: یاخته‌های نوتروفیل‌ با زنده‌مانی بیشتر از 95% جداسازی شدند. نتایج کروماتوگرافی و الکتروفورز ژل پروتئین نشان داد که پروتئین هترودیمر P7/P23 با موفقیت طی دو مرحله تخلیص شده است (مرحله اول حدود 60% و در مرحله دوم با خلوص بیشتر از 95%). وزن مولکولی هر کدام از منومرهای کوچک و بزرگ به ترتیب kDa‌‌7 و 23 تعیین شد. پروتئین تخلیص شده دارای فعالیت باکتری کشی بوده و تأثیر آن بر یرسینیا روکری (µg/ml 64) بیش‌تر از دو باکتری دیگر بود. نتیجه‌گیری نهایی: پروتئین تخلیص شده در طی فرایند تخلیص فعالیت خود را حفظ می‌کند. به علاوه فعالیت ضد باکتریایی نوتروفیل می‌تواند ناشی از پروتئین P7/P23  باشد.